平衡柱子
即用洗脱剂中极性小的溶剂（例如、、等）用计量泵（或氮气）打入（压入）层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶，不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来，而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外，此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润，且排出空气，有利于续后的洗脱分离过程。
当平衡用的溶剂从柱下流出后，树脂柱多少钱，可以停止此过程，改用洗脱剂洗脱分离过程；平衡过程也可以再理行一段时间，将柱子中的空气多排出一些，但溶剂耗量也会增加。
亲和层析柱装柱注意事项
一文了解亲和层析柱装柱注意事项
（1）非特异性洗脱
非特异性洗脱是指通过改变洗脱缓冲液pH、离子强度、温度等条件，降低待分离物质与配体的亲和力而将待分离物质洗脱下来。
当待分离物质与配体亲和力较小时，一般通过连续大体积平衡缓冲液冲洗，就可以在杂质之后将待分离物质洗脱下来，这种洗脱方式简单、条件温和，不会影响待分离物质的活性。但洗脱体积一般比较大，得到的待分离物质浓度较低。
当待分离物质和配体结合较强时，可以通过选择适当的pH、离子强度等条件降低待分离物质与配体的亲和力，具体的条件需要在实验中摸索。可以选择梯度洗脱方式，树脂柱供应，这样可能将亲和力不同的物质分开。如果希望得到较高浓度的待分离物质，可以选择酸性或碱性洗脱液，或较高的离子强度一次快速洗脱，这样在较小的洗脱体积内就能将待分离物质洗脱出来。
但选择洗脱液的pH、离子强度时应注意尽量不影响待分离物质的活性，而且洗脱后应注意中和酸碱，透析去除离子，以免待分离物质丧失活性。对于待分离物质与配体结合非常牢固时，可以使用较强的酸、碱或在洗脱液中加入脲、胍等变性剂使蛋白质等待分离物质变性，树脂柱，而从配体上解离出来。然后再通过适当的方法使待分离物质恢复活性。
层析柱装柱步骤流程
1.计算每厘米柱床高度填料的数量；
2.选择合适的配件和末端筛网，选择不合适的滤网可能导致较高反压或填料泄露；
3.选择装柱流速
首先：拍排泡
第二：调水平
第三：匀浆
第四：装柱
第五： 绘制压力/流速曲线，装柱流速为大流速的70%-****。
柱效检测
柱效主要取决于装柱质量。如果是离子交换或亲和层析填料，则不能使用有色物质，如蓝色葡聚糖。表征柱效的两个指标是理论板当量高度（HETP）和对称因子As，使用NaCl或通过测定UV吸收或电导率进行计算。
使用NaCl溶液进行测定，优点样品是易得、安全，缺点是可能与填料发生反应，特别是离子交换树脂，因此影响测定结果。使用进行测定，树脂柱厂家，其不与层析填料发生反应，并且可通过检测280 nm处的紫外吸收进行测定，并且，测定缓冲液的浓度可提高至10倍。
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